Bt新分离菌株条虫晶体蛋白基因的鉴定与克隆

摘要

苏云金芽孢杆菌是一种昆虫病原菌，它对昆虫的毒性主要依靠在芽孢形成期产生的具有杀虫专一性的各种杀虫晶体蛋白（InsectcidaI CrystaI Proteins，ICP3），编码ICP3的基因称cry基因，该研究首先用cryI，cryⅢ和cryⅤ基因的专一性引物对从土壤中分离到的56株苏云金芽孢杆菌菌株的基因类型进行PCR检测，其中2株含CryⅢ基因，7株含cryI基因，21株含cryⅤ与CryI基因。以HD-1的cryⅤ基因N端726bp特异性PCR产物为模板制备探针，进行Southern杂交分析，探明了21株含cryⅤ型基因的菌株其cryⅤ基因定位于150MDa左右的大质粒上，用PCR方法扩增对鞘翅目与鳞翅目昆虫皆有杀虫活性的S<,101>株的cryⅤ-z基因，克隆到BluescriptM 13（一）载体上，序列测定结果表明所得2157 bp序列与Tai1or等人（1992）报道的cryⅤ基因有6个核苷酸的差异，从而导致所编码的蛋白4个氨基酸的变异，故认为是一个新的cryⅤ基因。以pBV220为表达载体，在大肠杆菌中表达cryⅤ基因，表达产物进行SDS-pAGE分析，在81×10<'3>的位置上有一条较浓的蛋白带，用外源表达的cryⅤ蛋白对银纹夜蛾（Plusia agnataStaudinger）进行杀虫活性测定，无明显毒性。