一种球形芽孢杆菌新晶体蛋白：序列分析及其对敏感和抗性蚊幼虫的生物学特性分析

摘要

球形芽孢杆菌LP1-G是一株对敏感和抗性尖音库蚊具有较高毒力的蚊虫病原菌，属血清型H3．Southern杂交证明LPI-G总DNA中4．7kb HindⅢ片段上带有41．9和51．4×10<'3>晶体蛋白基因，该片段由4650个核苷酸组成。WesternBolt证明含晶体蛋白基因的重组质粒PLYN-I和PLYN-2能在大肠杆菌中表达产生42×10<'3>和51×10<'3>的晶体蛋白，但表达量低。篜LYN-I的无晶体型苏云金杆菌以色列亚种重组子（B-LYN-1）在其芽孢形成中能大量表达产生以晶体形式存在于芽孢孢外膜外的二元毒素蛋白（Bin4）．其42×10<'3>多肽（BinA4）同IAB59中的BinA1、C3-41中的BinA和222g7中的Bin3相差2～5个氨基酸；而51×10<'3>多肽（BinB4）同BinB1、BinB2和BinB3相差2～4个氨基酸；同时在Bin4的93位上是色氨酸而不是亮氨酸。生物测定表明LPI-G全发酵液对敏感和抗性尖音库蚊具有相同的毒性（LC<,50>=0．1g/mL），但从B-LYN-1中分离的纯化晶体蛋白对两种蚊幼虫无毒。体外标记的晶体蛋白同从敏感和抗性蚊幼虫体内分离的中肠上皮细胞膜分离物（BBMF）的结合实验证明，尽管该蛋白对库蚊幼虫无毒，但可以同库蚊幼虫的BBMF进行特异和孢和结合，对敏感和抗性蚊幼虫BBMF的平衡解离常数分别为15．1和5．5nmol/L异源竞争性结合实验证明LP1-G和C3-41的晶体蛋白具有相同的结合位点。该文的实验结果说明在LP1-G1菌株中的晶体蛋白是一种无毒的二元毒索蛋白，同时也说明在该菌株内存在另一种对敏感和抗性蚊幼虫具有杀蚊活性的杀蚊毒素。