竹黄菌Shiraia sp.SUPERH-168竹红菌素聚酮合成酶基因克隆及序列分析

摘要

本实验优化产竹红菌素最优液态发酵培养基(g/L):马铃薯200，可溶性淀粉20，酵母粉6，五水合硫酸铜0.6，磷酸二氢钾0.4，七水合硫酸镁0.4。在该培养条件下，借助Trizol试剂盒，提取RNA，并运用RT-PCR技术扩增得到合成竹红菌素聚酮合成酶cDNA序列，并克隆到T18载体。生物信息学预测结果表明，该酶含有2167个氨基酸，8个内含子区域，6个N-糖基化位点。NCBI blast比对显示，竹黄菌竹红菌素聚酮合成酶与其他真菌聚酮合成酶具有较低的同源性。该酶为部分还原的聚酮合成酶(PRPKS)，含有如下6个典型的保守结构域:酮脂酰合成酶(KS),酰基转移酶(AT),酰基转移蛋白(ACP)、脱水酶(DH)、硫酯酶(TE)结构域。rn 竹黄菌Shiraia sp.SUPERH-168竹红菌素聚酮合成酶编码序列载体的构建为后期研究竹红菌素代谢合成机理提供了原料基础，从分子水平，为解决自然界药用真菌中提取竹红菌素产量受限的问题，提供理论基础。