A组轮状病毒VP6基因在乳酸菌表达载体中的克隆与序列分析

摘要

用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)技术,从A组猪轮状病毒的总RNA中扩增了1356bp的VP6基因.用T4 DNA连接酶将其与乳酸菌的表达载体pW425t连接,并转化至胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)缺陷的大肠杆菌X51受体菌株中.经过功能弥补筛选、质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR扩增等技术鉴定重组载体,结果获得含有外源VP6基因的重组载体,命名为pW425t-RV6,并经核酸序列分析,表明克隆了轮状病毒的主要保护性抗原VP6基因中的抗原表位区.为下一步VP6基因在乳酸菌中表达及其疫苗研制奠定基础.