不同剪切速率下同型半胱氨酸对胶原诱导血小板活化的影响

摘要

观察同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY)对胶原诱导血小板活化及其信号途径的影响.浓缩血小板或洗涤血小板在37℃与不同浓度的HCY孵育后,应用血小板聚集仪或流室系统分别测定HCY对胶原诱导血小板的聚集及黏附作用.采用免疫沉淀-Western Blotting实验来观察Src激酶及PLCγ2酪氨酸磷酸化水平变化.结果发现:(1)在10~100μM浓度范围内,HCY能明显增强Ⅰ型胶原诱导的洗涤血小板的聚集反应.(2)在低剪切速率(100/s)时,较高浓度(50及100μM)的HCY能明显促进血小板黏附到胶原上;而较低浓度(10及25μM)的HCY却没有此作用.在高剪切速率(1600/s)时,10~100μM浓度的HCY对血小板黏附到胶原上的能力没有影响.(3)HCY能使Ⅰ型胶原刺激导致的Src激酶及RLCγ2的酪氨酸磷酸化水平更加升高;而整合素β1的封闭抗体能部分降低HCY的刺激作用.体外研究表明,HCY能协同促进胶原诱导的血小板活化反应,而且是通过它与血小板表面胶原受体之间相互作用,导致了GPVI(glycoprotein VI)及整合素α<,2>β<,1>信号途径的激活,包括Src激酶及PLCγ2.