差异筛选葛根素诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因的研究

摘要

目的:差异筛选葛根素促进兔血管平滑肌细胞凋亡相关基因,观察其在动脉粥样硬化组织中的表达,探讨葛根素防治动脉粥样硬化的可能机制.方法:采用DDRT-PCR技术筛选葛根素作用组体外培养家兔增值血管平滑肌细胞与正常培养家兔增殖血管平滑肌细胞mRNA表达差异基因,并用<'32>P标记该cDNA片断作为探针,采用Northern印迹分析法验证,组织原位杂交观察该基因在兔斑块组织中的表达水平.结果:1、差异显示图谱出现一些仅在葛根素组高表达而在对照组无表达的cDNA片断;2、将其序列与GeneBank进行同源性比较,证实其中3个序列均与兔葡萄糖调节94(GRP94)基因高度同源;3、Northern杂交证实GRP94基因在葛根素作用的血管平滑肌细胞中高表达,与差异显示图谱一致;4、Northern印记灰度扫描分析显示GRP94基因在血管平滑肌细胞中表达量与葛根素浓度(10<'-5>M~10<'-7>M)成正比;5、兔斑块组织原位杂交显示该基因片段在动脉粥样硬化斑块组织中表达水平增高.结论:1、提示葡萄糖调节蛋白94基因在葛根素促进增殖血管平滑肌细胞凋亡过程中表达增高,可能是葛根素作用靶点之一;2、该基因片段在动脉斑块细胞质中表达增高,提示如能上调该基因促进血管平滑肌细胞凋亡,将有可能是动脉粥样硬化防治的新途径.