抗HIV-1基因工程抗原gp120单克隆抗体的制备及gp120抗原检测方法的建立

摘要

目的 制备抗HIV-1基因工程抗原gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化并筛选能够配对检测基因重组gp120的单抗,并用之探索构建检测gp120的ELISA法,以期为研究HIV-1感染、检测、预防和治疗提供可用的单抗.方法 采用基因工程抗原gp120免疫BALB/c小鼠,传统杂交瘤技术制备抗基因重组gp120的McAb,ELISA法鉴定亚类和抗原结合特异性,选用IgG类单抗用SAS纯化并用HRP标记效价较高的纯化单抗,双抗体夹心ELISA法筛选配对单抗,并确定配对单抗检测基因重组gp120的灵敏度.结果 成功筛选出10株稳定分泌抗gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,9株为IgC.其中6H9和9H12可以配对检测gp120抗原.结论6H9和9H12采用双抗体夹心法配对检测gp120抗原的灵敏度是10ng/ml.