杜仲中木脂素类化合物的分离纯化和结构鉴定

摘要

目的:杜仲(EucommiaulmoidesOliver)为杜仲科杜仲属多年生落叶乔木,是我国特有药用植物,传统以干燥树皮入药,是名贵滋补药材.松脂醇二葡萄糖甙(PDG)、丁香脂素二葡萄糖甙(SDG)均属木脂素类化合物.现代药理研究表明,松脂醇二葡萄糖甙为杜仲中降血压的有效成分,丁香脂素二葡萄糖甙对磷酸二酯酶(cAMP)有强的抑制活性.虽然已有关于利用大孔树脂吸附纯化杜仲中活性成分的研究报道,但大孔树脂只能进行初步分离纯化,不能得到高纯单体.本文采用溶剂萃取-大孔吸附树脂-硅胶柱色谱联用法,对杜仲中木脂素类化合物进行分离纯化研究.方法:1)提取:称取干燥杜仲原料20g,加入200mL70﹪乙醇,在60°C恒温水浴锅中提取1小时,提取次数为3次,过滤,合并滤液,离心分离,减压蒸馏,浓缩至干,蒸馏水溶解后定容至50mL.2)分离纯化:i溶剂萃取一次纯化将提取液,用乙酸乙酯萃取三次,萃取条件为:乙酸乙酯:提取液=2:1(v/v);乙酸乙酯萃余液再用正丁醇萃取三次,萃取条件为正丁醇:萃余液-2.1(v/v).合并正丁醇的萃取液,减压蒸馏,回收正丁醇,并蒸至近干,所得膏状物用蒸馏水溶解完全后定容至50mL.ii大孔吸附树脂二次纯化根据本课题研究组前期研究成果,选用S-8型大孔吸附树脂对杜仲中松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二葡萄糖甙进行二次纯化.取处理好的树脂20g装柱,然后将经过初步纯化的杜仲提取液50mL缓慢倒入层析柱,依次用500mL不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱,收集40﹪的洗脱液,减压浓缩至干.iii硅胶柱层析分离制备松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二葡萄糖甙将ii所得杜仲浸膏用50mL甲醇超声溶解,拌入预处理后的硅胶60g,搅拌均匀后,置于60°C水浴中加热,挥发除去甲醇.将上述硅胶干法装入层析柱中,用不同配比的氯仿和甲醇混合溶液200mL洗脱.合并配比为12:1～8:1和7:1～4:1的洗脱液,减压蒸馏,分别得到丁香脂素二葡萄糖甙,松脂醇二葡萄糖甙粗品,重复操作2次,合并洗脱剂配比为8:1和4:1洗脱液组分,减压蒸馏,冷冻干燥后,分别得到丁香脂素二葡萄糖甙和松脂醇二葡萄糖甙精品.iv结构鉴定采用紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)和质谱(MS)三种方法对纯化后产品化合物1和化合物2进行鉴定.结果:种晶体经过UV,IR,MS定性分析确定为松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二葡萄糖甙,其纯度分别为90.86﹪和91.73﹪,回收率分别为42.14﹪和47.17﹪.结论:所建立的纯化方法能获得高纯度的松脂醇二葡萄糖甙和丁香脂素二葡萄糖甙,该法操作简单、成本低.