DNA芯片联合检测耐利福平和异烟肼分枝杆菌及其临床应用

摘要

目的：开发快速检测耐利福平和/或异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变的DNA芯片. 方法：根据结核杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5'端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果. 结果：35个利福平和异烟肼单耐药或双重耐药的结核分枝杆菌中有82.9﹪(29/35)用芯片法检出的结果与药敏培养法一致.其中利福平耐药样品突变检出率为100﹪(26/26);有20﹪(6/30)异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外. 结论：用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核杆菌耐药性检测.