真核细胞传感器快速检测环境水样的DNA损伤效应

摘要

本研究的目的是构建可检测外来化合物对真核细胞DNA损伤作用的真核细胞系作为真核细胞传感器,用于筛选环境水样的DNA损伤作用.方法：将对DNA损伤高灵敏的生长抑制和DNA损伤诱导基因153(GADD153)启动子构建到含荧光素酶报道基因的载体PGL3中,将该重组载体GADD153-LUC与pEGFP载体共同导入HepG2细胞中,构建重组人肝细胞突变株,筛选可以稳定表达GADD153-LUC的单克隆细胞株.发光检测已知致癌物和环境水样对稳定转染细胞的DNA损伤效应;同时RT-PCR检测内源性GADD153mRNA表达.结果：氯化镉可诱导内源性GADD153mRNA和荧光素酶活性表达增加,相关分析表明二者具有良好的相关性(r2=0.9539).该重组细胞株对已知环境致癌物以及实际水样的DNA损伤效应有较高的诱导作用.结论：该重组细胞株可用于检测痕量环境污染物的DNA损伤效应,对实际水样的DNA损伤作用有较高的灵敏性.