禽流感病毒RT-PCR及多重RT-PCR检测技术的研究

摘要

基于目前已知禽流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型、H5、N1、H9、N2亚型特异性RT-PCR及H5/N1、H9/N2、A/H5/N1多重RT-PCR检测技术,用于检测或同时检测和鉴别A型及H5N1、H9N2亚型禽流感病毒.从核酸提取、基因扩增到产物分析在3-4小时内完成.采用所建立的RT-PCR和多重RT-PCR,分析36株禽流感及相关病毒分离物,其结果与传统病毒分离鉴定完全一致,具有敏感性和高特异性,且与相关病毒或其它亚型无交叉反应.采用多重RT-PCR检测2004年、2005年采自昆明地区不同家禽的80份棉拭子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,二者H5N1、H9N2亚型鉴定结果完全吻合.结果表明该方法具有快速、简便、经济、安全、敏感、特异等优点,可作为临诊样品中禽流感病毒型及H5N1、H9N2亚型鉴定和诊断的有效方法。