猪圆环病毒2型遗传标记毒株的构建及生物学特性鉴定

摘要

以临床分离的猪圆环病毒2型(PCV2)为材料,利用PCR法扩增病毒基因组,将两个基因组顺序连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆.通过引物设计替换碱基,在病毒基因组内插入SalI制性内切酶位点作为遗传标记,经重组质粒转染细胞后获得一株带有遗传标记的病毒株.经免疫过氧化物酶单层细胞试验、免疫电镜、核酸序列分析表明,在感染病毒细胞核及细胞质中检出病毒特异抗原,基本与野生型病毒具有相似的抗原性、病毒形态和基因组构成.鉴于新病毒基因组内插入了SalI酶切位点,用PCR和限制性片断长度多态性分析可与野生型病毒核酸相鉴别.新毒株经细胞连续传60代,体外培养增殖性能稳定,毒价可达106.6TCID50/ml.取病毒培养物经静脉和滴鼻途径接种35日龄抗体阴性仔猪4头,接种后表现体温升高、消瘦、被毛粗糙和体表淋巴结肿胀,迫杀后多种脏器检测到病毒抗原和核酸.研究结果表明,通过感染性分子克隆构建具有遗传标记毒株,为今后开展本病毒的致病性、疫苗免疫、分子诊断等研究奠定了基础.