重组COLIA1基因Tet-on腺病毒的构建及其对MG63细胞生物学性能的影响

摘要

目的:构建含有Ⅰ型胶原α1链(COLIA1)基因的重组Tet-on腺病毒,并验证其对早期成骨细胞模型MG63细胞COLIAI基因表达的调控作用,为骨质疏松症的可调控基因治疗提供理论和实验依据.rn 方法:构建重组COLIA1基因Tet-on腺病毒.体外培养MG63细胞,分为5组.将重组COLIA1基因Tet-on腺病毒按不同转染滴度分为高滴度组(M.O.I=100ifu/cell)、中滴度组(M.O.I=50ifu/cell)、低滴度组(M.O.I=10ifu/cell),同时转染对照组(M.O.I=10ifu/cell),空白组不转染.转染成功后,高、中、低滴度组培养基中加入强力霉素(100ng/ml),对照组和空白组培养液中不含强力霉素.培养24h后通过RT-PCR检测MG63细胞COLIAlmRNA的表达水平,ELISA检测Ⅰ型胶原合成量.rn 结果:(1)成功构建重组COLIA1基因Tet-on腺病毒;(2)重组COLIA1基因Tet-on腺病毒感染MG63细胞后,高、中、低三个滴度组COLIA1 mRNA表达量及I型胶原合成量随着病毒滴度降低而降低,但均高于对照组及空白组,差异有统计学意义.对照组与空白组的COLIA1mRNA表达量及I型胶原合成量差异无统计学意义.rn 结论:重组COLIA1基因Tet-on腺病毒对MG63细胞COLIA1基因表达的调控具有时效性.强力霉素存在时,Tet-on系统开放COLIA1基因转录及表达,强力霉素不存在时,Tet-on系统关闭COLIA1基因转录及表达,且没有明显的基础表达存在.