珍稀濒危树种毛红椿微卫星DNA分离及SSR反应体系优化

摘要

本研究以江西宜丰种源毛红椿为材料，成功提取其基因组DNA。利用改良的链亲和素磁珠法亲和捕捉出毛红椿基因组微卫星DNA片断，并构建了富含微卫星的基因组文库。从构建的基因组文库中随机挑选了63个单克隆进行测序，其中50个单克隆成功测序，含有微卫星的单克隆有18个，并根据测序结果设计并合成SSR引物18对。利用所合成的引物优化SSR反应体系，对影响SSR反应的各个因子进行了探讨。确定了模板DNA浓度最适浓度为30ng；dNTP的最适浓度为0.3mmol·L-1；0.3μmol·L-1是引物在反应体系中的最合适浓度。建立了重复性好、稳定性好的SSR反应体系，为下一步进行毛红椿群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。