体外肝细胞毒性模型比较和何首乌致肝毒性成分的初步研究

摘要

目的：筛选和比较不同的体外肝细胞毒性评价模型的差异,探索何首乌致肝毒性的主要成分及其可能的作用机理.rn 方法：选择14个肝毒性阳性药物和3个阴性药物,采用CCK-8细胞毒性评价、高内涵筛选和肝相关生化指标评价等方法,对L-02、HepG2、HepaRG和hiHeps等四种人源肝细胞系和一种原代大鼠肝细胞(PRLs)进行比较研究.对何首乌的总醇提物及其分部位进行系统筛选,确定目标毒性分部位,与何首乌代表性的16种单体成分筛选结果比较,确定潜在毒性成分,并通过高内涵、蛋白质组学等方法进行初步的机制探索.rn 结果：HepaRG肝细胞在检测氧化应激、线粒体损伤以及内质网应激等方面灵敏性较高，呈剂量依赖性，优于其他四种肝细胞。何首乌中最可能的毒性成分为没食子酸、白藜芦醇、大黄素以及大黄酸。鉴于没食子酸在可能的毒性部位中含量最高，同时也是何首乌700-10总醇提物中的主要成分，推测没食子酸可能为何首乌潜在致肝毒性的主要成分之一。高内涵分析表明，没食子酸是通过引起内质网应激而引起肝细胞损伤。蛋白组学分析表明，没食子酸主要影响细胞的功能蛋白折叠，细胞骨架，炎症应激以及细胞的自身防御等生物学过程，肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)可能是没食子酸的潜在调控靶点。rn 结论：HepaRG肝细胞在体外肝毒性评价方面优于L-02、HepG2、hiHeps和PRLs四种肝细胞。没食子酸可能是何首乌潜在致肝毒性的主要成分之一，其机制可能是通过抑制PPIA的转录和翻译引起功能蛋白折叠紊乱，造成内质网应激，最终导致肝细胞凋亡。