鸭IFN-α成熟片段基因的克隆、原核表达及抗鸭瘟病毒活性初步研究

摘要

利用PCR从重组质粒PBV220-IFN-α中扩增鸭α干扰素(IFN-α)成熟蛋白基因,克隆到PMD18-T载体,最后将其连接到原核表达载体pET32a+,转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得高效表达.表达的基因工程蛋白分子量大小约37KD,占菌体总蛋白的35％,以包涵体形式存在.利用镍金属螯合介质填料对表达产物进行纯化,经过复性后加入长成单层的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h,接种100个噬斑形成单位的鸭瘟病毒(DPV)强毒,利用定量PCR检测1h、4h、9h、15h、23h、31h、39h、47h、55h、63h DPV数量变化的结果表明,基因工程IFN-α能明显抑制对数期的DPV复制,其DPV核酸的拷贝数比空白对照低5×108,表明所表达的基因工程鸭IFN-α具有进一步临床应用的潜力.