中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ基因的原核表达及鉴定

摘要

目的: 克隆中国鲎抗菌肽tachyplesin Ⅰ基因并构建其原核表达载体,为更深入的研究抗菌肽的活性及提高抗菌肽的产率制备新型的肽类抗生素创造条件.方法: 以已构建的tachyplesin Ⅰ基因的质粒pPIC9-KRY为模板,PCR扩增得到tachyplesin Ⅰ,将其克隆到pMD18T-simple vector进行序列鉴定,酶切后连入PQE-40中,得到带有运载蛋白DHFR的融合表达载体,再酶切构建于原核表达载体PQE-80L进行表达并进行SDS-PAGE分析,电洗脱纯化蛋白,进行体外抑菌试验.结果: 通过PCR扩增到69bp的目的DNA片段,得到tachyplesinⅠ原核表达载体PQE-80L-DHFR-SH16,诱导得到了分子量25500左右的重组蛋白,纯化后的蛋白对大肠杆菌有抑菌作用.结论: 中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ的克隆和原核表达,为进一步研究制备抗耐药菌的肽类抗生素奠定基础.