表达IBVN蛋白并以其作为包被物建立ELISA方法

摘要

作为传染性支气管炎病毒的一个免疫原,衣壳蛋白(N蛋白)是一个很有潜力的检测蛋白.本研究利用特异性引物从传染性支气管炎病毒M41株克隆出N基因,利用大肠杆菌原核表达系统表达出重组N蛋白,并把纯化好的N蛋白作为ELISA板的包被抗原.结果表明,该重组蛋白与其他禽类病毒的血清不发生交叉反应,证明该重组蛋白只对传染性支气管炎的抗体有特异性反应.另外,田间试验结果表明直接从养禽场取得的血清样品可以直接作为该ELISA方法的检测材料,而且该方法的阳性和阴性检出率与市面上出售的标准检测试剂金100％吻合.用重组N蛋白包被的ELISA方法由于只使用了一种病毒蛋白而没有使用全病毒作为包被抗原,因此该方法显然比传统方法更安全更环保.因为N蛋白是传染性支气管炎病毒最保守的蛋白之一,所以当出现新血清的传染性支气管炎病毒时利用该方法有可能更容易更快速地检出新型毒株.