含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建

摘要

将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失转移载体质粒pPI-2.EGFP.VP2.采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-1)用BamH Ⅰ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒成功构建,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93kd的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的免疫特性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒.