H9N2亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的构建

摘要

根据国内外已公布的AIV H9N2亚型全基因组序列设计了8对引物,分别对低致病力禽流感病毒H9N2亚型毒株A/Chicken/Guangxi/KMⅢ/99(简称KMⅢ)进行了全基因组RT-PCR、测序及序列分析.将获得的8个cDNA片断分别插入到双表达载体pBD中,使得cDNA置于CMV启动子之下,与RNA聚合酶Ⅰ启动子反向连接.经酶切、质粒PCR、测序等结果确定,KMⅢ株的八质粒转染系统构建成功.将八个双向转录表达质粒共转染293T细胞,传代等,经血凝活性测定、RT-PCR等检测结果表明拯救的病毒具有复制和传代能力.由此,本研究建立了H9N2亚型AIV的反向遗传操作技术平台,为禽流感病毒分子致病力的研究、病毒毒力基因结构功能的研究、载体疫苗的研究及筛选出理想的疫苗候选株奠定了基础.