鸡补体因子C3d增强禽流感病毒M2的抗原性研究

摘要

为验证获得的鸡补体因子C3d生物学功能,本研究分别将一个C3d基因、2个C3d基因同禽流感sM2基因(缺失跨膜区的M2基因)串联在一起,中间用柔性肽链Linker1(L1)、Linker2(L2)连接,构建表达了4个融合蛋白,分别为GST-C3d-sM2,GST-C3d-L2-sM2,GST-C3d-L1-C3d-sM2,GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2.将所获得的4个融合蛋白及对照组GST-sM2蛋白免疫BALB/c鼠4次,ELISA测定免疫小鼠血清中的sM2抗体水平.结果表明,4个融合蛋白免疫的BALB/c鼠体内sM2抗体水平分别比对照组高1.99、3.45、4.55、6.55倍.另外,分别将sM2及C3d-L1-C3d-L2-sM2基因插入真核载体pcDNA3.0,构建表达质粒pcDNA-sM2和pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2,这两种质粒与GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和GST-sM2蛋白同时免疫14日龄SPF鸡3次.结果表明,GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2蛋白免疫组的鸡血清中sM2抗体水平明显高于其它各组(P＜0.01).无菌采集每只SPF鸡的血液,分离淋巴细胞,以脂多糖(LPS)作为丝裂原,进行淋巴细胞转化试验(MTT法).结果表明,GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2蛋白与GST-sM2蛋白免疫组淋巴细胞增殖差异极显著(P＜0.01),pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2和pcDNA-sM2免疫组细胞增殖差异也极显著(P＜0.01).这些结果提示,在原核表达的融合蛋白免疫时,鸡补体因子C3d可以增强禽流感病毒M2蛋白体液免疫的效果,而在DNA疫苗免疫时,更倾向于细胞免疫增强作用.