猪圆环病毒Ⅰ型ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1) ORF1基因序列,设计合成了一对引物,对PCV1 ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(939bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒命名为pMD-ORF1.测序分析表明，克隆的ORF1与澳大利亚分离株AY754015.1核苷酸序列同源性高达99.6％.与其他PCV1核苷酸序列同源性为99.6％～98.8％,推导的氨基酸序列同源性为99.4％～98.4％.将ORF1双酶切产物插入原核表达载体PET-41a,得到重组子命名为PET-ORF1.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明PCV1 ORF1在PET-41a中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为67.6 ku.