TCRP1通过BCR-ABL和AKT1蛋白调控CML细胞的增殖

摘要

目的：从分子水平阐明TCRPI的表达在慢性髓系白血病发生发展过程中的作用和机制，为探寻白血病的致病机制提供新的思路，为开发白血病新的治疗靶点提供理论和临床实践的依据。rn 方法：分别提取慢性髓系白血病细胞系K562细胞和正常儿童外周血淋巴细胞的总RNA和总蛋白，分别用实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测TCRPI的mRNA水平和蛋白表达水平。在K562细胞中进行TCRPI的siRNA干扰，分别对TCRPI干扰表达细胞及其对照细胞进行MTS实验和克隆形成实验，分析TCRPI对K562细胞活力的影响。在K062的细胞裂解液中用TCRPI的抗体进行免疫共沉淀，在沉淀产物中用Western blot实验检测BCR-ABL和AKTI的表达。同时在K562细胞蛋白裂解液中分别用c-ABL和AKTI的抗体进行免疫共沉淀，在沉淀产物中用Western blot检测是否存在TCRPI蛋白。培养TCRPI干扰表达的K562细胞及其对照细胞并提取蛋白，用Western blot的方法检测NFкB和BCL2的表达。rn 结果：TCRPI在CML细胞系K062中表达升高，并且干扰TCRPI的表达抑制了K562细胞的增殖和活力。生物信息学分析显示TCRPI蛋白序列中有多个ABL激酶的基序，免疫沉淀实验结果显示TCRPI能分别和BCR-ABL蛋白及AKT1蛋白相互作用。干扰TCRPI表达后，K562细胞中NFкB和BCL2的表达均降低。rn 结论：TCRPI可能通过BCR-ABL和AKTI/NF кB信号通路在CML细胞的增殖中发挥重要作用。