赤参提取物诱导人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡及其机制的探讨

摘要

目的:研究赤参提取物对人肝癌细胞株 HepG2细胞凋亡诱导的作用及其机制的探讨.方法:采用MTT法观察赤参提取物对HepG2细胞的生长抑制作用,DNA凝胶电泳、流式细胞仪分析观察赤参提取物对HepG2细胞的凋亡诱导效应,caspase蛋白酶活性检测法及RT-PCR检测法从分子水平上探讨赤参提取物对HepG2细胞的凋亡诱导机理.结果:用0.25、0.5、1.0、2.0 mg/ml的赤参提取物分别处理培养生长良好的HepG2细胞12, 18, 24 和36 h ,MTT 细胞活力分析示:HepG2 细胞实验组存活细胞明显低于对照组,并且有时效和量效关系.不同浓度的赤参提取物作用HepG2 细胞24 h 后,细胞基因组DNA经凝胶电泳,可发现随着药物浓度的增加,梯带(DNA ladder)强度增强,细胞凋亡呈明显的量效关系.流式细胞仪凋亡峰(sub-G1峰)分析,在0.25～2.0 mg/ml 剂量的赤参提取物作用下HepG2 细胞凋亡率显著增加,浓度为2.0 mg/ml作用HepG2细胞 24h 后,细胞调亡率达到了64.15％,赤参提取物诱导细胞凋亡效应呈剂量依赖性;在检测赤参提取物对caspase-3,-8,-9的活性影响时,发现1.0 mg/ml赤参提取物在作用HepG2细胞6h时 caspase-3,-9 的活性均最强,随后活性逐渐降低,而caspase-8 的活性升高不明显,以上结果亦提示了赤参提取物诱导HepG2 细胞凋亡与激活caspase 途径有关.Bcl-2 为抑制凋亡基因,Bax, p53为促进凋亡基因,用RT-PCR方法检测Bcl-2、Bax、p53 mRNA表达量时,Bcl-2 mRNA表达量剂量依赖性地逐渐减少, 而Bax和p53 mRNA表达量剂量依赖性地增加.结论:赤参提取物对HepG2细胞的增长抑制作用主要通过诱导细胞凋亡;激活caspase-3, -9的活性,降低Bcl-2 mRNA表达和增加Bax,p53 mRNA表达为赤参提取物诱导HepG2细胞凋亡的机制之一.