LPS诱导原代培养肝实质细胞与枯否细胞表达和释放HMGB1

摘要

目的:观察LPS诱导HMGB1在肝实质细胞与枯否细胞的表达和细胞外释放. 方法:培养瓶中分别培养原代肝实质细胞和枯否细胞，24 h后收获对照组和500 ng/ml LPS诱导组两种细胞，反复冻融，用半定量RT-PCR和Western blot法检测HMGB1-mRNA水平和HMGB1表达水平；接种原代肝实质细胞和枯否细胞于24孔板中，继续培养6 h、12 h、24 h和48 h，Western blot法检测各时间点对照组和500ng/ml LPS诱导组培养液中HMGB1含量. 结果: LPS诱导24h后，与相应对照组比较，肝实质细胞和枯否细胞HMGB1-mRNA表达水平明显增强(t=31.32和45.90)，HMGB1蛋白表达水平也明显增强(t=46.19和38.44)；在6h、12 h、24 h和48 h各时间点，对照组两种细胞及诱导组肝实质细胞培养上清液中仅检测到少量HMGB1，延长培养时间，培养上清液中HMGB1含量均未见增多；与对照组比较，诱导组枯否细胞培养液中的HMGB1含量在6 h无显著增加(t=1.48)，但培养随时间延长，其含量明显增高(F=42.74)，且在12 h、24 h和48 h均明显高于对照组(t分别=21.95，32.39，44.16). 结论: LPS可诱导肝实质细胞和枯否细胞HMGB1表达增强，肝实质细胞不主动释放HMGB1，而枯否细胞能主动释放HMGB1到细胞外.