局灶性脑缺血模型大鼠脑基底节蛋白质组差异表达图谱的构建

摘要

目的：采用线栓法致大鼠局灶性脑缺血,应用蛋白质双向电泳技术,观察双向电泳技术分离脑缺血大鼠基底节组织在蛋白质水平上发生的改变,以探讨蛋白质变化在脑缺血中可能起到的作用。rn 方法：(1)Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组,各组又分为6h、24h两个时间段。动物模型参照Longa(1989年)线栓法并加以改进。假手术组除不向颈内动脉内插线外,其余步骤同模型组。大鼠于造模手术清醒后,行神经功能缺陷评分,评分合格后在规定时间快速断头取脑。(2)采用超速离心法提取基底节组织蛋白质,4组蛋白质样品提取过程中,尽量在相同条件下进行。并保证提取蛋白质的整个过程在低温状态下进行,避免在样品提取过程中发生蛋白变性、降解。其次,提取组织蛋白质时所需裂解液等试剂尽量同一批次配制。(3)对4组蛋白质提取物行并联双向凝胶电泳,保证了电泳图像较高的一致性和重复性。采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析技术,分析凝胶图像和找出差异表达蛋白点。电泳过程中使用预制的宽pH范围的固相pH梯度电泳胶条,以提高蛋白质分辨率。(4)以MALDI-TOF-MS技术结合数据库检索进行蛋白质鉴定。rn 结论：对假手术6h和24h组及模型6h和24h组基底节组织蛋白质提取物，采用宽pH范围的电泳凝胶及并联进行大鼠的双向凝胶电泳，可以有效地将局灶性脑缺血损伤大鼠异常改变的基底节蛋白质分离开来，这些差异表达的蛋白质可能与脑缺血损伤后的蛋白质应激有关。