从脑肿瘤基因工程鼠中分离脑肿瘤干细胞

摘要

目的:从转基因小鼠脑肿瘤模型中分离鉴定肿瘤干细胞,为进一步研究其起源奠定基础。方法:将转基因小鼠脑肿瘤组织制成单细胞悬液,培养于无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、EGF和B27)和含血清培养基(DMEM+10﹪FCS)。用相差显微镜观察细胞形态,电镜观察其超微结构,用流式细胞仪检测Hoechst33342阴性SP细胞,以及其细胞周期和染色体倍体,免疫荧光检测球体及其分化细胞中的Nestin、NSE、GFAP表达情况。结果:转基因小鼠脑肿瘤细胞在无血清培养基(DMEM/FF12,添加bFGF、EGF和B27)条件下,呈悬浮干细胞球体生长,在含血清的培养条件下,贴壁分化成类胶质细胞和神经元。电镜结果显示其具有核质比高,细胞器不发达的干细胞特征。通过Hoechst33342标记后流式细胞仪检测肿瘤干细胞球体中SP细胞比例为17.27﹪,其中异倍体细胞比例为26.77﹪。细胞球体中大部分细胞表达Nestin,少数细胞表达GFAP和NSE,并且这些细胞在含血清培养液条件下,大部分细胞表达神经元和胶质细胞标志物NSE和GFAP。结论:转基因小鼠脑肿瘤中存在肿瘤干细胞,并能在无血清干细胞培养条件下长期培养。