杨树SSR荧光标记反应体系及反应条件优化

摘要

以响叶杨、银白杨以及响叶杨×银白杨F1代94个单株为试材，利用TP-M13自动荧光检测系统，通过正交设计直观分析法优化杨树SSR荧光标记技术中PCR反应体系和条件。通过实验确定10μl反应体系最佳因子组合为：Taq聚合酶：0.75U；Mg2+：2.0mmol/L；dNTP：0.15mmol/L；引物(R&M13)：0.20μmol/L；引物F：0.05μmol/L。最佳PCR反应程序为：95℃2min；94℃30s，59℃30s，72℃4s，30个循环；94℃30s，53℃30s，72℃45s，8个循环；72℃延伸30min；4℃保温。并利用此反应体系和程序，对F1代94个单株进行了SSR反应，证明了其可行性。