稳定同位素内标超高效液相色谱串联质谱法测定人体细胞中乙醛-DNA加合物的含量

摘要

在本次研究中，发展了一种稳定同位素稀释超高效液相色谱-电喷雾电离串联质谱法(UPLC-ESI-MS/MS精确测定人体细胞中乙醛-DNA加合物的含量，同时延续之前检测丙烯醛-DNA加合物的方法用碳酸氢钱(NH 4HC03)提高加合物的离子化效率从而提高质谱检测的灵敏度。通过外标法建立标准曲线确定了该方法的线性范围和检测限(LOD,S/N=3).对于Cro-dG的分析，取MRCS细胞DNA进行直接酶解;对于Eti-dG的分析，取MRCS细胞DNA，在酶解的过程当中加入NaBH3CN使不稳定的Eti-dG转化为稳定的Eth-dG.[15Ns] Eth-dG和[15Ns]Cro-dG被用作内标。经检测Eti-dG(6S,8S)和(6R,8R),Cxo-dG在MRC5细胞中的含量分别为15.8±1.3(mean±SD)per108 nts,6.4±0.3 per108nts和4.2±0.3per108nts。本研究的结果表明乙醛-DNA加合物Eti-dG和Cro-dG存在于人体正常细胞当中，并证明它们是常见的内源性DNA加合物。