导入pthA-nls及其ScFv基因获得抗溃疡病柑橘新种质的研究

摘要

柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease)是由地毯黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.citri)引起的一种世界性检疫性病害,病原基因pthA是柑橘溃疡病亚洲型(A型)致病所必需的因子,其中3个核定位信号区是PthA的重要功能区,在寄主细胞内起识别定位的作用.本研究将pthA的核定位信号NLSs构建正义和反义基因,导入柑橘感病品种甜橙中;另一方面,制备抗致病因子PthA核定位信号肽NLS单克隆抗体,并构建单链抗体基因ScFv并将ScFv导入甜橙,通过NLSs和ScFv在柑橘体内表达,阻断致病蛋白向细胞核的运输途径,从而达到抗病的目的.试验结果表明,成功获得了9株转pthA-nls、12株转pthA-a-nls和12株转ScFv基因甜橙,以溃疡病菌液接种3个转基因系列和对照甜橙植株离体叶片,试验结果表明,转pthA-nls基因和ScFvs基因植株叶片对溃疡病表现出一定的抗性,而转pthA-a-nls基因植株叶片对溃疡病表现与对照一样敏感.试验获得了对柑橘溃疡病具抗性的转基因植株,为进一步研究柑橘溃疡病的致病机理及无抗病基因的物种进行抗病育种提供了技术参考.