逆转录病毒载体介导shRNA抑制猪瘟病毒增殖的研究

摘要

本研究在实验室前期研究的基础上,选取4个有效抑制猪瘟病毒增殖的干扰基因N1、N2、S10和S11,其中N1和N2针对Npro基因,S10针对NS3基因,S11针对NS4A基因,进行逆转录病毒栽体介导的抑制猪瘟病毒增殖的研究.首先包装出重组逆转录病毒,感染PK-15细胞获得稳定表达干扰基因的细胞克隆,然后采用间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒滴度三种方法测定了细胞表达的shRNA抑制猪瘟病毒增殖水平.结果:成功包装出携带干扰基因的重组逆转录病毒,并筛选获得稳定表达干扰基因的PK-15细胞克隆,间接免疫荧光、荧光定量PCR和病毒滴度三种方法测定结果表明接毒后12-60h,与对照细胞相比,荧光比例、病毒基因组的拷贝数和病毒滴度保持较低的水平,比对照细胞低1-2个数量级,48h病毒基因拷贝数抑制倍数分别为149.3,病毒感染滴度抑制倍数分别为143.54.随着时间的延长,抑制作用降低,但是仍有一定的抑制作用.