Stx2噬菌体φMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

摘要

利用λ噬菌体的Red重组系统，将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌0157：H7 Min27株的stx2基因中，获得O157：H7 Min27的突变菌株Min27(△six：：cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导，结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的Stx2噬菌体，命名为φMin27(△stx：：cat)。将φMin27(△stx：：cat)感染21株不同血清型的大肠杆菌，采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选，观察它对细菌的裂解和溶原转换情况。其中2株血清型分别为O60和O 138的大肠杆菌可以被该突变噬菌体溶原感染，表现出对氯霉素的抗性，但没有形成噬菌斑，而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后，能释放出感染性的φMin27(△stx：：cat)颗粒，并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。试验结果表明φMin27(△stx：：cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌，且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体，显示出φMin27(△stx：：cat)噬菌体具有携带外源基因在不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力，为进一步研究Stx噬菌体在不同属菌株之间的溶原转换和Stx毒素表达机制提供了重要的技术平台。