耐亚胺培南铜绿假单胞菌中整合子的鉴定与分析

摘要

目的:对耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)中的整合子进行鉴定，并分析其携带耐药基因盒的特点。方法:收集2003-2007年临床分离的IRPa共74株，采用琼脂稀释法检测这些菌株对亚胺培南的MIC，并用K-B法检测IRPa对其他抗生素的耐药率；利用整合酶基因PCR-RFLP筛选携带整合子的菌株，并对这些整合子进行分类；整合酶阳性菌株用普通PCR扩增检测整合子的qacE△1-sull基因和整合子可变区的耐药基因盒，并对整合子可变区扩增产物进行测序及序列分析，判断整合子所携带的耐药基因盒是否介导对亚胺培南的耐药。结果:亚胺培南对74株IRPa的MIC50和MIC90，分别为32 mg/L和64 mg/L；对13种抗菌药物的耐药率为0～81.08%；其中共检出16株(22.86%)携带整合酶基因，均为I类整合子，并且qacE△1-sull基因扩增均为阳性；16株整合酶基因阳性的IRPa中，有14例检出整合子可变区，经测序共得到7种整合子耐药基因盒的组合形式，这7种组合均携带有氨基糖苷类修饰酶基因，有些携带β内酰胺酶基因及未知功能的基因；其中有4种为新发现的整合子可变区组合分别是：aac(6)-Ⅱ-unknown-CatB3、aac(6)-Ⅱ-catB3-ORFⅡ-ORF Ⅲ、aac(6’)-Ⅱ-blaPl b-aadA2、blaIMP-9-aacA4-OXA-10和aadA2-like、，登陆序列号分别为FJ917747、FJ817422、FJ817423、FJ655384和FJ958368。结论:整合酶阳性的IRPa中，仅2株IRPa的I类整合子中携带的IMP-9与亚胺培南的耐药有关，其它菌株的整合子中未检测到相关的碳青霉烯类β内酰胺酶的基因盒，其携带的基因盒主要是介导Pa对氨基糖苷类与其他β内酰胺类抗生素耐药，这些不同I类整合子可变区耐药基因盒组合可能是铜绿假单胞菌表现为多重耐药性的物质基础，还有一些编码未知功能蛋白质的基因盒有待进一步的研究。