小反刍兽疫病毒Nigeria75/1毒株N基因重组杆状病毒的构建及ELISA抗体检测方法的建立

摘要

本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，构建小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因的重组杆状病毒。构建含有PPRV N基因的转移载体pFastHTA-N，转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统，将该基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中，转染昆虫细胞Sf21，获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。PcR鉴定含PPRV N基因的重组杆状病毒构建成功，感染昆虫细胞后，SDS-PAGE鉴定出60 ku左右的蛋白表达。Western blotting检测出该蛋白具有很好的抗原性。利用杆状病毒表达系统，成功地构建了含PPRV N基因的重组杆状病毒，以重组PPRV N蛋白做抗原，建立ELISA方法检测羊血清中的PPRV N蛋白的抗体情况。