使用新型荧光和MS敏感标记试剂快速制备游离N-糖用于HILIC分析

摘要

目的:开发一种集灵敏度、样品制备通量、操作简单性于一体的游离N-糖制备方法,用于HILIC分析,并评估其性能.rn 方法:基于合理设计,合成了一种可以协助进行N-糖分析的新型标记试剂,开发出一种优化的"三步法"N-糖样品制备工作流程,并使用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对快速糖基释放过程的效果进行了评估.rn 结果:大约10 min内完成糖蛋白的糖基释放并生成N-糖胺,再与新型RapiFluor-MS试剂快速反应,5 min即可被标记上由高效荧光基团以及能提高荧光、MS检测灵敏度的强碱性叔胺基团组成的标记物.用时不超过15 min,通过μElution HILIC SPE将所得的RapiFluor-MS标记糖基从反应副产物中提取出来,该法能够对多种糖基(从中性到四唾液酸化蛋白糖基)进行定量回收.rn 结论:GlycoWorks RapiFluor Fluor-MS N糖分析试剂盒克服了传统2-AB、Instant AB及PCA方法的缺点,可实现前所未有的蛋白糖基检测灵敏度,同时提高了N-糖样品的制备通量.