用改良试剂盒提取陈旧血膜DNA用于疟疾基因溯源研究

摘要

目的:建立一种能够提取陈旧血膜DNA的方法,为疟疾基因溯源研究奠定基础.rn 方法:应用DNA抽提试剂盒(QIAamp DNA Mini Kit)改良后提取41份疟原虫吉氏染色血膜DNA,并与Chelex-100和Na2HPO4法进行比较.套式PCR扩增疟原虫SSU rRNA基因片段,鉴定疟原虫虫种.PCR结果进行测序和序列比对,统计分析80年代与近10年血膜、不同血膜处理方法以及不同质量血膜的PCR阳性率差异.rn 结果:改良试剂盒法PCR结果总阳性率为70.7％(29/41).80年代和近10年血膜PCR阳性率分别为78.6％(11/14)和66.7％(18/27),两组之间差异无统计学意义(X2=0.63,P＞0.05).经去油、脱色处理和未经处理组血膜的PCR阳性率分别为62.5％(15/24)和82.4％(14/17),两组之间差异无统计学意义(X2=1.89,P＞0.05).质量较好和较差血膜的PCR阳性率分别为93.3％(28/30)和9.1％(1/11),两组之间差异有统计学意义(X2=27.59,P＜0.01).测序结果表明扩增目的片段与预期结果一致.Chelex-100和Na2HPO4法PCR未能扩增出特异性目的条带.rn 结论:试剂盒(QIAamp DNA Mini Kit)改良法提取80年代血膜DNA可获得较高PCR阳性率,且染色剂和镜检油渍对血膜DNA提取效果无明显影响.