表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒对小鼠免疫原性的研究

摘要

以含有SIV HA基因的重组质粒pMD18-H3HA为模板，利用带特定酶切位点的引物PCR扩增HA基因，将其亚克隆入质粒pIRES2-EGFP中，再次将舍有H3队及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315，构建重组穿棱质粒pDC315-H3HA-EGFP.利用脂质体转染方法将穿梭质粒pDC315-H3HA—EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGlox△E1，E3Cre共转染HEK293细胞，基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选重组腺病毒rAd—H3HA—EGFP.将重组病毒rAd—H3HA—EGFP以108TCID50。两次接种6周龄的BALB/c小鼠，时间间隔为3周，通过检测免疫小鼠的抗体水平及对病毒攻击的保护情况评价该重组病毒的免疫原性。结果HA基因已被重组到腺病毒的基因组中，并能够伴随病毒的复制而表达，表达蛋白具有良好的生物性活性.重组腺病毒rAd—H3HA—EGFP以1 × 104TCID50的剂量免疫小鼠后，能够诱导产生高水平的特异性抗体，并对H3亚型SIV的攻击提供完全保护.