犬2型腺病毒云南强毒株的分离鉴定

摘要

我们在进行犬腺病毒分子流行病学调查过程中。应用MDCK细胞从云南送检的犬粪便中分离出1株犬腺病毒样粒子(命名为SY株)，并对其进行了系统鉴定。分离的rn 病毒在MDCK细胞上能引起葡萄串样典型的细胞病变：用培养物上清作电镜负染观察，见有呈20面体立体对称，大小约80nm，表面具有排列整齐壳粒的腺病毒样粒子;取其细胞成分作电镜超微结构观察可见其细胞核中有呈晶格状排列的腺病毒样粒子前体：理化特性鉴定表明SY株能抵抗乙醚、酸(pH 3)、热(50℃)，但能被DNA合成抑制剂5-IUDR所抑制；对犬、猪原代与传代肾细胞敏感，对其它细胞不敏感；SY株能凝集大鼠和人“O”型红细胞而不凝集豚鼠的红细胞；交叉中和试验结果表明，SY与标准CAV-2的豚鼠免疫血清具有很密切的亲缘关系(R=95％>70％)；而与标准的CAV-1亲缘关系相对较远(R=28％<70％);用分离的病毒对易感犬进行人工感染，接种的犬出现发烧、咳漱、鼻炎、腹泻等CAV-2感染的典型的临床症状和病理解剖变化;SY毒株的病毒核酸与用32p标记的CAV特异核酸探针杂交结果与参考的标准病毒一样，呈阳性杂交信号;应用CAV特异引物，进行SY的DNA PCR扩增，结果仅出现1条与标准CAV-2参考病毒相同，分子量为1030bp核酸电泳带。通过以上的形态学、理化学、血清学、动物感染试验与分子生物学鉴定，证明我们所分离的SY株为1株CAV-2病毒强毒株。