2型猪链球菌毒力因子gapdh基因的克隆、表达及细胞互作蛋白的初步寻找

摘要

2型猪链球菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)是一种糖分解酶，负责将磷酸甘油醛GAP磷酸化产生1，3-二磷酸甘油酯DPG，通常存在于细菌胞浆中。细菌表面的多功能GAPDH蛋白可能与细菌毒力密切相关。rn 本研究以2005年四川分离的2型猪链球菌(SC19)基因组为模板，利用PCR扩增gapdh基因，扩增片段大小为1011 bp。构建了表达质粒pET-gapdh，并成功在大肠杆菌BL21中表达，大小约为41 kDa的融合蛋白GAPDH，与预期结果相符。通过Western blot检测，证实GAPDH具有良好的免疫学活性。应用纯化的GAPDH蛋白，制备了兔抗GAPDH蛋白的多克隆抗体。HeLa细胞是2型猪链球菌感染的模型细胞之一，因此，本研究提取了HeLa细胞的总蛋白，运用配体重叠技术(ligand-ovcrlay approach)，初步寻找到了一个可能与GAPDH蛋白作用的受体蛋白，为进一步研究2型猪链球菌的分子致病机理奠定了的基础。