副猪嗜血杆菌gapdh基因的克隆、表达及免疫原性研究

摘要

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是副猪嗜血杆菌细胞壁上的一种重要蛋白质，可能与该菌的免疫原性密切相关。为寻找副猪嗜血杆菌免疫原性蛋白，研制有效的新型疫苗，本课题根据GenBank中公布gapdh基因序列设计一对引物，以血清5型副猪嗜血杆菌(SH0165)基因组为模板，利用PCR扩增gapdh基因，扩增片段大小为1020bp，测序结果与GenBank公布的序列100%同源。构建了表达质粒pET28a-gapdh，并在大肠杆菌BL21中表达，蛋白大小约为38kDa，与预期结果相符。进一步通过Western blot检测，证实GAPDH具有良好的免疫学活性。应用纯化的GAPDH蛋白，制备了兔抗GAPDt蛋白的多克隆抗体。小鼠的免疫保护试验结果表明：该蛋白对小鼠具有很好的免疫保护，是一种很好的疫苗抗原靶标。