改进trizol法提取高质量的丝状真菌米根霉的总RNA

摘要

由于后续米根霉分子生物学实验研究的需要,本研究对商业化的Trizol 法进行较大的改进,并与比商业化的常规trizol 法、实验室常用的热苯酚法提取丝状真菌米根霉总的RNA的纯度、完整性以及产量的差异进行了对比,获得了比较理想的结果.菌体培养24h之后,分别称取100mg 菌体进行trizol 法、热苯酚法和改进的trizol 法提取总RNA,采用琼脂糖凝胶电泳对总RNA的完整性进行分析,并用紫外分光光度计测量总RNA的A230,A260,A280,对总RNA的产量、纯度和完整性进行比较分析.分析结果显示,上述三种方法提取的RNA的产量依次约为20.75ug、12.09ug、18.57ug,改进的trizol方法提取的总RNA的A260/A280、A260/A230的比值分别为2.04、2.05.改进的trizol 法提取总RNA的产量与trizol 法相比稍低,但明显比热苯酚法高;电泳结果显示同样的上样量3ul,改进的trizol 法提取的总RNA可以清晰的看到五条带,trizol法则只能看到三条带,热苯酚法可以看到两条带,改进的trizol法提取的总RNA 亮度明显高于其他两种方法,说明改进的trizol法提取总RNA 具有更高的纯度和完整性,降解更少,而且除盐和蛋白的效果也很好.提取的总RNA完全可以满足后续实验cDNA 文库的构建、实时定量PCR 检测对高质量RNA的要求.