角膜混浊小鼠突变候选基因Map3kl的克隆与序列分析

摘要

目的：对具有角膜混浊表型的B6-Co突变系小鼠突变候选基因Map3kl进行克隆及测序分析，寻找该突变系小鼠Map3kl基因的突变位点。rn 方法：以小鼠Map3kl基因的mRNA、全长及上游5kb序列设计引物，分别以基因组DNA和mRNA为模板，采用PCR和RT-PCR技术分段扩增目的基因，将目的片段连接在T载体上，转化感受态细胞TOP10，筛选阳性克隆，质粒DNA分子提取，电泳检测，ECOR Ⅰ酶切释放目的片段，送上海生工测序。rn 结果：成功扩增出Map3kl基因的20个外显子和上游调控序列，测序结果表明B6和B6-Co小鼠Map3kl基因序列无差异，但与基因组数据库序列比对，第13号染色体第112559574碱基由T突变为A。rn 结论：B6-Co突变系小鼠Map3kl基因未发现与表型相关的突变位点，该基因的表达调控机制及蛋白质剪切机制有待深入研究。