荧光定量方法对奶牛不同生理阶段MHC-I类基因表达的研究

摘要

通过对人类和小鼠的研究发现，主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex，MHC)基因通过直接或间接免疫，影响配子品质和胚胎发育.牛的MHC被命名为牛白细胞抗原(bovine leukocyte antigen，BoLA)，根据MHC编码蛋白的类型，MHC基因可分为I类(class-Ⅰ)和Ⅱ类(class-Ⅱ).为研究奶牛主要组织相容性复合体Ⅰ类基因mRNA在不同生理时期的表达量，采用了敏感的荧光定量聚合酶链反应检测方法进行定量分析.根据GenBank上已报道的牛MHC-I类基因序列，设计合成十对引物，设计引物软件DNAMAN;样本采自上海奶牛研究所下属奶牛场，分别取青年牛、怀孕第四周左右、怀孕中期、围产期、屡配不孕牛，五个不同时期的血液样本，提取全血中RNA，逆转录为cDNA，常规PCR验证引物后，进行荧光定量实验.结果发现在不同时期，MHC-I类基因的表达量有着显著不同，这对研究奶牛怀孕时期的特殊免疫机制提供了分子方面的理论.经对比，屡配不孕牛与正常青年牛的MHC-I类基因表达也有一定差异，对于分析受孕机制有十分重要的意义.利用实时荧光定量PCR技术对基因mRNA的表达水平进行研究非常可靠，研究结果具有可比性和重复性.