结核分枝杆菌MPT83的表达、鉴定及其在牛结核病检测中的应用

摘要

利用大肠杆菌系统表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白,建立间接ELISA方法并用于牛结核病临床检测,评价其应用潜能.PCR扩增mpt83基因,分别构建pMD18-mpt83和pET-mpt83重组质粒,经鉴定正确,后者转化BL21(DE3)诱导表达并纯化,鉴定产物特性;建立间接ELISA方法,检测临床采集的奶牛血样,与牛γ-干扰素试验结果比较,评价其用于牛结核病血清学检测的能力.SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导后在约30 kDa处出现新条带,与目的蛋白理论分子量相符,诱导5h后表达量占菌体总蛋白26.1％,纯化产物纯度达98％.Western blotting结果显示,融合蛋白能与兔抗H37Rv多抗血清及自然感染牛结核阳性血清特异性反应,表现出良好免疫反应性.初步建立了ELISA方法,检测临床样品2 14份,与γ-干扰素试验结果符合率分别为25.2％(阳性)和97.8％(阴性).MPT83蛋白在大肠杆菌系统中高效可溶性表达,获得免疫反应性良好的纯化产物,并成功建立其间接ELISA方法,可用于牛结核病血清学临床检测研.