凝集素：半夏及掌叶半夏毒针晶中的化学刺激性毒性成分

摘要

目的：寻找半夏属两种毒针晶中共同含有的蛋白，研究共有蛋白的致炎效应。rn 方法：采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段，采用液相色谱与串联质谱偶联(LC-ESI-MS/MS)分析降解后的肽段，将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析。半夏块茎粗提液经硫酸按分级沉淀、疏水柱层析、离子交换柱层析，分离纯化半夏凝集素蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及胶内酶解后LC-ESI-MS/MS分析半夏凝集素蛋白、半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白。以中性粒细胞向腹腔迁移试验、家兔眼结膜刺激性试验、大鼠足跖肿胀试验及腹腔渗出液中PGE2含量测定观察半夏毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应。rn 结果：半夏及掌叶半夏毒针晶中共有的凝集素蛋白具有致炎效应，分子量约为13kDa。半夏凝集素可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移，其作用可被α-甲基-D-甘露糖苷抑制。家兔眼刺激性试验显示单给药凝集素不具有刺激性，但凝集素可显著增强毒针晶致家兔眼结膜水肿及大鼠足肿胀。α-甲基-D-甘露糖苷可显著抑制毒针晶致家兔眼结膜水肿，同时抑制半夏毒针晶及半夏凝集素致小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量。rn 结论：凝集素类蛋白具有致炎作用，是半夏毒针晶及掌叶半夏毒针晶引起炎症反应产生刺激性的共性化学刺激物。毒针晶产生刺激性毒性的机制在于针晶刺入组织后，针晶上的凝集素蛋白随针晶进入组织诱导中性粒细胞向刺入部位迁移而产生严重的炎症反应。