新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

摘要

目的：探讨脑内移植混合培养的人脐血间充质干细胞(MSCs)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤个核细胞，再通过贴壁细胞培养法培养出人脐血MSCs。rn 方法：当细胞传至第3代时，随机取培养的8份脐血间充质干细胞(半量)为A组，8份脐血问充质干细胞(半量)为B组，将A、B组各剩余的半量脐血间充质干细胞混合为C组。3组细胞密度均为1.0×106L-1。混合培养的第3代脐血MSCs用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD34、CD86、HLA-ABC和HLA-DR的表达。选择P3代脐血MSCs作为移植细胞，并经52-澳尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)体外标记，7日龄新生SD大鼠50只制备HIBD模型，造模过程中死亡3只，随机抽取5只进行HE染色，剩余42只分为混合移植组(n=16)和单份移植组(n=16)和对照组(n=10)。造模后第3天，在立体定位条件下，细胞移植组大鼠经左侧大脑皮层注入人脐血MSCs，对照组在相同部位注入相同体积的PBS。在细胞移植后第7天，各随机选择6只细胞移植组大鼠处死取脑，通过脑组织免疫组织化学检测方法观察移植细胞在脑内的存活、迁移情况。于移植后第1、7、14、21、28天采用改良神经功能损害评分(mNSS)方法对三组大鼠的神经功能进行评价。rn 结果：活细胞计数显示，将2份不同脐血间充质干细胞混合后，细胞增殖比单份脐血间充质干细胞快(P<0.05)。移植组大鼠脑组织免疫组织化学检测发现移植细胞在脑内能够存活，并以移植点为中心向周围迁移，移植后7天混合移植组的BrdU阳性细胞数多于单份组(P<0.05)。mNSS检测结果显示，移植第1天移植组大鼠mNSS低于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)，第7、14、21、28天混合移植组大鼠mNSS低于单份移植组组，差异有统计学意义(P<0.05)，7、14、21、28天移植组大鼠mNSS低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。rn 结论：混合培养的人脐血MSCs脑移植可能对新生大鼠HIBD具有较好的治疗作用。