TGF-β-Smad信号通路相关细胞因子在小鼠非酒精性脂肪肝干预中的差异表达

摘要

研究目的：rn 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种肝组织病理学改变与酒精性肝病相类似但无过量饮酒史的临床综合征,病理上分单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎和脂肪性肝硬化.随着社会经济发展,NAFLD患病率迅猛增高,现已成为危害人类健康的三大肝病之一,中国的脂肪肝患者中,非酒精性脂肪肝的流行现状相对较重.TGF-β-Smad信号传导通路是一条证实在非酒精性脂肪肝及肝纤维化过程中起到重要作用的信号传导通路，为其诊疗提供了新的途径。TGF-β1是与其受体结合后激活Smad蛋白，开启TGF-β-Smad信号转导通路，完成生物学效应。肝纤维化发病机制的研究显示肝星状细胞（HSC）激活与转化是肝纤维化形成的关键。转化生长因子-B1（TGF-B1）在此过程中起重要作用，是促活HSC，并促进其表达细胞外基质（ECM）的关键因子。本研究拟通过探讨中等强度有氧运动联合中药对小鼠非酒精性脂肪肝干预中TGF-β-Smad信号信通路及相关细胞因子的差异表达及可能分子机制，为其在非酒精性脂肪肝疾病的临床康复应用提供理论和实验依据。rn 研究方法：rn 1、实验对象及分组选用昆明小鼠100只，随机分为7组：模型组、空白组、跑台组、游泳组、中药组、跑台+中药组、游泳+中药组。2、非酒精性肝病模型构建采用高脂、高糖灌胃构建非酒精性肝病模型，具体流程略。3、运动方案及中药干预中药给药方案：中药处方略，按人与小鼠体表面积折算等效剂量经口灌胃药。中药+跑台组、中药+游泳组、和中药组小鼠于建模成功后第二天后开始每天（下午6时）灌胃中药1次，剂量5ml/只，共给药6周。游泳运动方案：游泳组、游泳+中药组小鼠放入水深30cm，桶直径70cm，水温28-30℃的水桶中进行无负重有氧游泳运动训练，第1-3d适应性游泳30min，第4-6d每天逐渐增加l0min，逐渐递增至60min，保持此运动强度，持续6周，每周休息1天。跑台运动方案：跑台组、跑台+中药组小鼠采用0%坡度，速度10m/min跑台中，训练同游泳组方案，逐渐递增至60min，保持此运动强度，持续6周，每周休息1天。4、检测方法6周后，小鼠禁食过夜，采用生物化学法测定生物化学分析法检测血清谷草转氨酶AST、谷氨酰转肽酶GGT、γ-谷氨酰基转肽酶γ-GT和乳酸脱氢酶LDH含量。免疫组化法检测肝组织TGFβ1生长因子及CBP/P300蛋白表达水平；RT-PCR法检测肝组织肿脏中smad2、smad4mRNA表达水平。rn 研究结果：rn 1、肝组织TGF-β-Smad免疫组化检测结果在各组肝脏组织中均有TGF-β-Smad的表达，其中跑台+中药组、游泳+中药组TGF-β表达较高，其次依次为跑台组、游泳组、中药组，模型组表达最高。模型组与其他各组比较差异具有非常显著统计学意义（P<0.01）。2、肝组织smad、TGF-β的Real-timePCR检测结果mRNA在各组肝脏组织中均有smad、TGF-βmRNA的表达，其中模型组表达最高，其次依次为跑台组、游泳组、中药组，游泳+中药组、跑台+中药组表达最低。模型组与其他各组比较差异具有显著统计学意义（P<0.05）。rn 研究结论：rn 目前西药对于非酒精性肝病尚无特效疗法，而中药复方对于本病的治疗具有独特的疗效。研究显示中药复方具有多靶点多作用的特点，对信号传导通路的复杂多变有极佳的调控效果。另外，研究显示长时间中等强度运动训练可改善机体的免疫功能，提高机体的红细胞免疫能力和粒细胞的吞噬能力，从而在预防炎症的发生、感染性疾病的治疗方面发挥一定促进作用。