血清中非胆固醇类固醇GC/MS分析中衍生化技术研究

摘要

血清中含有极微量的非胆固醇类固醇，研究发现，非胆固醇类固醇与血脂代谢有着密切的关系，例如高脂血症、冠心病等心脑血管疾病。准确及时测定血清中的非胆固醇类固醇，可以为某些心脑血管疾病的前期诊断和后期治疗提供重要依据。固醇类物质的常用测定方法为气相色谱法，但配备常规检测器的气相色谱法难以满足血清中痕量固醇的分析要求。目前痕量分析主要使用气质联用法，该法具有良好的检测灵敏度。由于固醇类物质本身的高沸点和血清中含量极少的特性，检测前需要对目标物衍生处理转变为相应的硅醚。通常采用六甲基二硅胺(HIVIDS)、三甲基氯硅烷(TMCS),双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)等硅烷化试剂和吡啶的混合物作为衍生试剂进行样品衍生。此类衍生试剂在衍生过程中容易发生副反应，易产生肉眼可见的沉淀，在检测中引入杂质，灵敏度也会受到影响。为了克服现有衍生法副反应多、检测灵敏度差的缺陷，本实验比较了3种衍生试剂对质谱检测血清中非胆固醇类固醇的优劣。rn 经分析，HIVIDS+TMCS+pyridine(3+1+9)与BSTFA+TMCS(99+1)衍生效果(特征峰的峰面积)之间有显著性差异(t＜0.05)，MSTFA与BSTFA+TMCS(99+1)衍生效果(特征峰的峰面积)之间亦有显著性差异(t＜0.05)，因此，与BSTFA+TMCS (99+1)相比，HMDS+TMCS-pyridine(3+1+9)与MSTFA衍生均有较好的灵敏度。MSTFA衍生后，定量离子的响应因子(RRF)变异系数较小(10%以内)，表明该衍生方法的重复性较好。此外，采用MSTFA作为衍生试剂，不产生肉眼可见沉淀，而且使用单一衍生试剂，操作方便。