新的ZAP-70分析方法在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用

摘要

目的：采用流式细胞术(FCM)检测并采用全新的分析方法判断慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中CD5+CD19+细胞中ZAP-70表达，建立一种判定ZAP-70表达的更为规范可信的分析方法。方法：采用三色抗体组合CD5-FITC/CD38-PE/CD19-PerCP以及四色组合CD3+CD16+CD56-FITC/ZAP-70-PE/CD19-PerCP/CD5-APC检测162例CLL患者骨髓或外周血白血病细胞ZAP-70、CD38的表达，其中男105例，女57例，中位年龄64．7(34-84)岁，CD38结果采用百分比表示。用2种检测方法:①以CD3+CDS+T淋巴细胞，作为ZAP-70的阳性控制，再分离CDS+CD19+细胞(CLL肿瘤细胞)并分析ZAP-70的表达率，ZAP-70≥20%为阳性。②首先检测10名正常人外周血CD19+B淋巴细胞中ZAP-70的表达，将通道数分辨率从方法①的1024改为256,分别比较几何平均荧光强度(geo mean)、平均荧光强度(mean)和中位值(median)参数，结果显示geo mean数据最为稳定。结果：和方法①比较，方法②中ZAP-70和CD38表达相关性增高（r=0.384, r=0.425);采用方法②后IgVH和ZAP-70两者相关性增高(r=0.304 r=0.570)0此10例采用方法①ZAP-70表达均为在15%-25%。结论：采用geo mean为判定结果的标准，数据分析更关注于正态分布状态，并将通道数分辨率从常用的1024设为256避免了百分比在20%附近多种因素可能造成的人为判断误差。采用该分析法后，我们更改了10例方法①的结果，我们认为，采用这一改进方法作为判定ZAP-70的标准，均使ZAP-70和CD38、IgVH是否突变的相关性增高，结果更为客观合理可靠。