CD138 RACS结合Ⅰ-FISH和cIg—FISH技术检测多发性骨髓瘤1q21扩增的比较

摘要

目的:本研究分别采用胞浆轻链免疫荧光结合FISH (cIg-FISH)技术和CD138磁珠分选(MACS)结合荧光原位杂交(I-FISH)技术对48例MM患者lq21扩增进行检测，研究多发性骨髓瘤（MM）中lq21扩增情况，对比CD138磁珠分选(MACS)结合荧光原位杂交(I-FISH)技术和胞浆轻链免疫荧光结合FISH (clg-FISH)技术的一致性，进一步探讨MM患者lq21扩增与疾病发展及预后之间的相关性。rn 方法:1.研究对象：收集48例MM患者标本，疾病诊断及分期参照张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》（第三版）。2.CD138 MACS结合I-FISH。3.clg-FISH。4.图像采集与分析。5.统计分析。rn 结果:1.分组：我们将实验结果分为两组：出现lq21扩增定义为阳性组；未出现扩增定义为阴性组（包括缺失、正常）。辨别浆细胞：骨髓瘤细胞的胞浆经κ或λ染色后，胞浆染为蓝色，非瘤细胞胞浆不着色。2.cIg-FISH:阳性组死亡率明显高于阴性组(P<0.05)，两组患者在性别、年龄、D-S分期、ISS分期、分组和β2-MG含量均无统计学差异(P>0.05)。3.CD138 MACS结合I-FISH:阳性组死亡率明显高于阴性组(P<0.05)，两组患者在性别、年龄、D-S分期、ISS分期、分组β2-MG含量均无统计学差异(P>0.05)。4.CD138MACS分选结合I-FISH与clg-FISH两种技术检测lq21扩增结果比较：对比两种检测方法阳性率，差异无统计学意义(P>0.05)。本实验证实CD138MACS分选结合I-FISH敏感性高于cIg-FISH。即CD138MACS分选结合I-FISH在检测骨髓浆细胞较低的患者时灵敏度较高。rn 结论:间期F-ISH技术可利用位点特异性探针检测间期细胞中的核型异常。采用CD138磁珠分选(MACS)富积骨髓瘤细胞结合间期FISH对MM核型异常进行检测，二者结合大大提高了MM核型异常的检出率。但磁珠筛选需要特殊的分选设备，分选成本较高，且费时费力；另一方面由于骨髓的稀释和在筛选过程中的损失，导致分选效率较低，影响实验的正常进行，同时对标本需要量较多。胞浆轻链免疫荧光结合FISH( clg-FISH)技术，与传统FISH相比无需进行磁珠分选，利用单个核细胞滴片后直接与探针杂交，实验时间较短，费用较低，需要采集的骨髓标本量较少，易于标本的收集。仅需要了解患者的轻链类型，以便选择正确的抗体即可。本研究说明这两种检测方法一致性较好，可以互相替代，这样有利于部分骨髓不易收集患者的核型检测，扩大选择范围，同时节省费用。我们实验结果进一步显示5例CD138MACS分选结合I-FISH技术检测阳性者，采用clg-FISH检测呈现阴性，并且这5例患者的骨髓浆细胞比例明显低于其他26例两种检测方法共阳性的患者(P<0.05)。说明当患者骨髓浆细胞比例较低时CD138MACS分选结合I-FISH技术较clg-FISH技术更灵敏(P<0.05)。因此，对于骨髓浆细胞比例低的患者采用CD138MACS分选结合I-FISH技术更为妥当。对于l号染色体异常的研究有助于揭示MM患者疾病的临床进展及预后机制，从而找到相应的治疗手段。本实验采用两种方法检测lq21扩增阳性率均高于Arkansas研究小组和Mayo研究小组的结果30%-40%。推测亚洲人种lq21扩增率较高。本实验研究发现lq21的扩增与患者性别、年龄、D-S分期、ISS分期、分组、B 2-MG含量无显著的统计学意义。但伴有Iq21扩增阳性组患者死亡率明显高于阴性组，差异有统计学意义(P<0.05)，说明存在lq21扩增的患者有较高的死亡风险，从另一个侧面证实了lq21扩增是MM患者预后差的重要指标之一，可以通过监测其表达情况来判断疾病的进展及疗效的情况。